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DIY外泌体专用血清的常用方法

来源:缔一生物发布时间:2021-11-12阅读次数: 收藏

各位小伙伴们,晚上好!


今天文章的主题是无外泌体血清


外泌体大家应该都很熟悉。1983年,在绵羊网织红细胞中首次发现了现在生物学研究领域炙手可热的“小网红”——一种特殊囊泡结构,并与1987年正式被命名为“exosome”。

外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。为细胞间通讯的重要媒介,它像一个信使,为细胞与胞外环境传递信息,保障机体的正常工作。


越来越多的科研人员投入到外泌体的研究中,根据PubMed统计显示,最近几年,外泌体研究呈爆炸增长。



外泌体的研究离不开细胞培养。以肿瘤相关外泌体研究为例,目前,收集肿瘤细胞外泌体主要有两种方法:

方法一

使用正常培液养细胞再换无血清培液收外泌体。

方法二

直接使用exosome-free FBS配制培养基用于培养细胞收外泌体。


从现有的一些研究可以看出[1][2][3][4][5],研究人员更倾向于方法二,也就是使用exosome-free FBS培养细胞再收上清分离exosomes的方法,至少肿瘤研究方面是这样的。

相关文献在这里



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[1] Zhou W ,   Fong M ,   Min Y , et al. Cancer-Secreted miR-105 Destroys Vascular Endothelial Barriers to Promote Metastasis[J]. Cancer Cell, 2014.

[2] Boelens M ,   Wu T ,   Nabet B , et al. Exosome Transfer from Stromal to Breast Cancer Cells Regulates Therapy Resistance Pathways[J]. Cell, 2014, 159(3):499-513.

[3] Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver[J]. Nature Cell Biology, 2015, 17(6):816-826.

[4] Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis[J]. Nature, 2020, 2015,527(7578):329-35.

[5] Melo S A ,   Luecke L B ,   Kahlert C , et al. Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer[J]. Nature, 2015, 523(7559):177-182.



所以,接下来就不得不讲讲exosome-free FBS——无外泌体血清了。

顾名思义,无外泌体血清就是外泌体含量极低,低到几乎没有的血清(以粒径分析结果为标准),获得主要有两种途径:


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自己DIY制备

如果选择自己制备无外泌体血清,最常用的方法就是超速离心法。主要有三种策略:(前提是将血清用正确的方法彻底解冻,分装,按照实验需求选择合适用量进行去除外泌体的实验,血清解冻方法请参照这里:如何解冻血清才能最大程度保证活性?


将血清与培养基1:4比例稀释,然后超速离心10000g过夜收集上清;


直接将血清速离心10000g过夜收集上清;


180000g离心3-6小时收集上清。

P.S.其中,离心的过夜时间要视情况而定,一般在10-14小时之间,也可适当延长离心时间。


需要注意的是,离心后,外泌体会富集在试管底部,在吸取上层血清的时候,不要触碰底部沉淀,避免吸到沉底的外泌体,“一夜回到解放前”。


另外,只吸取80%左右的上层血清,其余的浑浊血清留作其他非外泌体用途细胞的培养,毕竟血清也挺贵的,避免不必要的浪费。


针对超速离心后的血清,可进行粒径检测(离心前样品和离心后样品),如果觉得纯度不够,再把离心后收集的血清做二次超速离心。


当然啦,以上方法也只是我们根据已有文献和相关实验室的经验总结的来的,仅供大家参考,如果有更好的方法,也欢迎在评论区和我们交流!


选择自己手动DIY无外泌体血清,可以在一定程度降低血清的成本,Ausbian血清,高品质,实验更安心,用来DIY成外泌体实验专用血清也是不错的选择。



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