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细胞培养的实验室对支原体污染预防的几种方法

来源:缔一生物发布时间:2021-07-30阅读次数: 收藏

支原体的污染肉眼不易察觉,直到严重的阶段才会出现培养基变色、细胞异常等情况。支原体可造成细胞代谢改变,基因表达谱发生变化,从而严重干扰实验进程。本文缔一生物为您分析细胞培养的实验室对支原体污染预防的几种方法

因此,在细胞培养过程中,定期监测是否存在支原体污染,及时预防支原体污染是每个科研人员的工作之一。下面笔者给您推荐几个支原体防控的产品,仅供参考。这些都是德国Minerva Biolabs公司出品,在国际期刊上也具有很高的引用率。

一、环境中的支原体污染的预防和清除

Mycoplasma OffTM是一款支原体喷雾剂,用于清除工作区域中的支原体。它起效快(10秒钟即起效),安全无毒,对细胞不会产生不良影响,喷洒后,可再用干净纸张擦拭即可。对于工作台以及各种细胞操作的器具表面,均可使用。如果是需要避免沾染液体的电子设备,可使用Mycoplasma OffTM湿巾擦拭。

细胞孵箱、水浴锅等有温水的地方,也容易滋生支原体、细菌等。在循环水中倒入Water ShieldTM(1:200稀释)即可有效地预防滋生,效果可持续1个月左右。

Mycoplasma OffTM对许多细菌、病毒也有预防和杀灭作用。

二、细胞培养中支原体污染的祛除

通常来说,被污染的细胞应该丢弃,以避免成为污染源。但对于珍贵的细胞,可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往别的品牌的支原体清除剂,其实只是抑制剂,它们抑制支原体的DNA合成和蛋白合成,但无法杀除。Mynox®是市面上唯一一款具有杀灭作用的清除剂。它提取自枯草杆菌,可与支原体膜特异性结合,破坏膜通透性,导致支原体膨胀破裂而死。使用Mynox®一般在2-3个小时即可完成清除任务。

Mynox Gold®是Mynox®的升级版,它通过四个疗程产生作用。每个疗程即细胞传一代。它除了包括Mynox®,也包含复合抗生素成分。以往别的品牌的支原体清除剂只是针对支原体的抗生素成分,但也容易产生耐药。Mynox Gold®将Mynox®和抗生素结合,即结合了二者的优点,又去除了二者的不足,因为有的细胞对Mynox®的治疗不太适应,而Mynox Gold®要比Mynox®更加温和,对细胞的毒性效应极小,因而更适用于脆弱的不太好养的细胞。

三、细胞培养中支原体污染的预防

Zell ShieldTM直译过来是细胞盾牌,它不仅能杀菌,还可抑制支原体的蛋白和DNA合成,因而能避免支原体的污染。使用时按1:100的比例加到培养基中,即可使用。它是复合抗生素成分,支原体耐药的出现几率很低。

四、细胞培养中支原体污染的监测

可使用MB公司出品的Venor® Gem系列,最常用的是一步法试剂盒(Venor® Gem OneStep),它采用灵敏的PCR方法,能识别常见的至少二十七种支原体。所有试剂均在一管内,为稳定的冻干粉形式,用缓冲液溶解后可直接使用。细胞上清取2l即可完成支原体的筛查。

总之,支原体虽然发生率高,但可放可控。以上仅仅列举的是实验室的情况,对于生物制药企业,如果是病毒液中发现支原体的污染,也可以采用Mynox®进行清除。总之,支原体的检测和预防已成为一项常规操作,这对保障细胞学实验的顺利进行,是非常重要的。

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