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病毒检测Kit (RT-qPCR法)(新冠病毒推荐)

英文:ConviFlex™ RT-Taq Mix

品牌:德国MB(Minerva Biolabs)

货号:192-0025,192-0100,192-0250

规格:25次/盒,100次/盒,250次/盒

用途:定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测新冠病毒等此类病毒

价格:¥9900

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    病毒检测Kit  (RT-qPCR法)(新冠病毒推荐)

    ConviFlex™ RT-Taq Mix


    品名

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    病毒检测Kit(RT-qPCR法)(新冠病毒推荐)

    英文名:ConviFlex™ RT-Taq Mix

    品牌:德国MBMinerva Biolabs

    192-0025

    192-0100

    192-0250

    25/

    100/

    250/

    2-8°C

    冻干粉复溶后在

    ≤-18°C保存


    一、产品用途:
    病毒检测Kit  (RT-qPCR法)(新冠病毒推荐))(英文名:ConviFlex RT-Taq Mix)用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测新冠病毒等此类病毒。

    二、产品描述:
    1. 该试剂盒为实时定量qPCR(RT-qPCR)RNA病毒检测试剂盒。

    2. 试剂盒由两种组分组成:

    组分1.

    ConviFlex™ RT-Taq Mix

    (冻干粉,红盖)

    组分2.

     Rehydration Buffer

    (复溶缓冲液,1.5ml/管,蓝盖)

     

    规格

     

    货号

    1

    1

    25/

    192-0025

    4

    1

    100/

    192-0100

    10

    2

    250/

    192-0250


    组分1.  ConviFlex™ RT-Taq Mix的冻干粉包含:MuLV逆转录酶、Taq聚合酶及dNTP。
    其中MuLV逆转录酶,来自小鼠白血病病毒(M-MuLV)并经过基因修饰。
    这里的Taq聚合酶另兼具热启动功能。
    此Taq酶在室温下,活性被抗体所抑制,当温度达到70°C以上时,才会被完全激活。
    在70°C 以下时,由于Taq酶没有完全活化,因此实验不会产生非特异性PCR产物和引物二聚体。热启动Taq酶的使用可使PCR具有更高的特异性和灵敏度。

    3. 试剂盒使用时,先用复溶缓冲液溶解冻干粉,再加入自备的RNA模板和引物。
    推荐使用MB公司提供的新冠病毒的引物/探针(英文名:SARS-CoV-2 Confirm,
    货号271-2100)

    4. 该试剂盒适合大多数RT-qPCR体系和qPCR仪类型。关于实验使用的最佳体积、浓度、温度和孵育时间,本文有相应的建议,但实验室仍可依据自己的分析要求作相应调整。

    三、产品特点:
    1. 冻干粉为逆转录酶和Taq酶的预混液,将RNA逆转录与qPCR扩增两个过程合并,一步完成,减少移液次数、避免交叉污染、操作简单,节约时间。
    2. Taq酶具有70°C热启动功能,显著提高试剂盒的特异性和敏感度。
    3. 主要组分为冻干粉,4℃保存,储存运输方便,性能稳定。

    四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器:

    1. 引物、探针(可选)
    推荐MB公司提供的新冠病毒的引物/探针(英文名:SARS-CoV-2 Confirm,
    货号271-2100)
    2. 荧光定量PCR仪(qPCR仪)
    3. 无DNase和RNase的qPCR反应管
    4. 离心机
    5. 移液器及带滤芯吸头(不含DNase和RNase)
    6. 用户自己的样品。

    五、样本制备说明:
    1. 来自于真核细胞、原核细胞、病毒的RNA以及体外转录的RNA,均可用于检测。
    2. 制备的RNA必须不含RT-qPCR抑制剂,例如有机溶剂等。
    3. 尽量减少RNA样品的冻融次数,同时避免RNA酶污染,以减少RNA降解的风险。(RNA降解会极大地限制了RT-qPCR反应的性能)
    4. 样本制备过程中,注意避免其他DNA的污染,DNA的干扰也会降低qPCR的准确性。
    建议采用商品化的RNA提取试剂盒预先处理待检物(如拭子、活检组织、哺乳动物细胞和细菌),例如MB厂家的
    【RNA小提试剂盒】(英文名:ExtractNow™ RNA Mini Kit,货号603-1050)
    【病毒RNA提取试剂盒】
    (英文名:ExtractNow™ Virus RNA Kit, 货号611-1010/-1050/-1250)

    或使用其他已建立的方法。

    六、操作注意事项:
    该试剂盒应仅由经过培训的实验室人员使用。始终穿上合适的防护服和戴一次性手套。
    根据样品类型,应谨慎处理所有样品。 该试剂盒不含有害物质。残余物可以根据当地法规丢弃。

    七、操作步骤
    步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。

    步骤2.  每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。
    (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。
    1个反应mix需要:
    ①ConviFlex™ RT-Taq Mix(即上面复溶的预混液)10µl,
    ②引物(浓度0.1 - 0.5 µM)
    ③探针(浓度0.1 - 0.5 µM)
    ④PCR级水(使每管总体积为15µl)
    注:引物和探针的推荐浓度范围是0.1-0.5 μM。
    通常,引物浓度过高,会增加引物错配和非特异RT-PCR产物。然而,当RT-PCR程序运行时间较长或使用简并引物时,则推荐引物浓度升高至1 μM。(注意:若使用简并引物,同一RT-PCR分析中,引物之间应具有相同的熔解温度)
    (2)将反应mix涡旋并离心5秒钟。
    (3)每个PCR管中加入15μl反应mix和5μl样本(抽提后的RNA),
    或5μl RNA提取试剂盒中的洗脱缓冲液,作为阴性对照,或5μl PCR级水作为无模板对照,或5μl阳性对照。
    (4)扣紧PCR管,然后短暂离心。
    (5)将PCR管放置qPCR仪上,盖好盖。

     步骤3. 在qPCR仪上设置反应程序,
    示例:  1 cycle   50 °C for 20 min
    1 cycle   95 °C for 10 min
    45 cycles 95 °C for 15 sec
    60 °C for 1 min
        (以上程序仅依据厂家经验,用户可根据实际情况调整温度和孵育时间)

    步骤4. 启动程序

    八、使用注意事项:
    1.使用前应认真阅读说明书。
    2.来自不同批次的试剂不能混合。
    3.试剂盒内的试剂应始终作为一个整体溶解分装。
    4.试剂盒应在效期内使用。
    5.每次PCR至少应设置一个阳性对照。每次PCR至少应设置一个阴性对照和/或一个无模板对照。如果实验者自己抽提RNA,则可使用洗脱缓冲液作为阴性对照。对照必须与待测样品的处理方式相同。您也可能需要其他实验室提供的对照品,例如含高、中、低不同浓度的RNA样品。使用对照,对于确认结果的可靠性或用于排除故障非常有意义。
    6.建议在无RNA和DNA污染的条件下进行RT-PCR,以避免操作过程中DNA或非特异RNA的交叉污染。(MB公司推荐使用PCR污染祛除喷雾,英文名:PCR Clean™,货号15-2025,预先清洁实验环境。)
    7.RNA模板浓度,应依据提取RNA的质量、来源、感兴趣基因的相对丰度、以及是否为低拷贝基因,来调整优化。
    8.该试剂盒建议逆转录步骤的温度为50°C。但这个温度及持续时间可根据实验室自己的分析要求进行优化,以增强反应的性能。

    九、其他相关试剂

    品牌

    品名

    货号

    规格

    德国MB

    新冠病毒引物/探针

    英文名:SARS-CoV-2 Confirm

    271-2100

    100/

    德国MB

    病毒RNA提取试剂盒

    英文名:ExtractNow™ Virus RNA Kit

    611-1010

    10/

    611-0050

    50/

    611-1250

    250/

    德国MB

    拭子病毒提取Kit  

    英文名:ExtractNow™ Virus RNA Swab Kit

    611-2250

    250/

    德国MB

    PCR污染祛除喷雾

    英文名:PCR Clean

    15-2025

    250ml/(带喷嘴)

    15-2500

    5L/桶(补充装)

    德国MB

    PCR污染祛除湿巾

    英文名:PCR-Cleanwipes

     

    15-2001

    50/

    15-2002

    5×50/

    (补充装)


    更多详情可访问,德国MB官网:www.minervabiolabs.com
    中国总代理北京缔一生物官网:www.dyshengwu.com

    咨询及订购热线:400-166-8600,13810768975,010-84118494
    Q Q:1580434811,1258888686
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    (缔一生物)


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