400-166-8600
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水中微生物DNA抽提Kit

英文:AquaScreen Fast Extract

品牌:德国MB(Minerva Biolabs)

货号:32-1010

规格:10次/盒

用途:用于从水样中提取微生物DNA。

价格:¥4600

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    水中微生物DNA提取试剂盒

    AquaScreen®  Fast Extract


    品名

    货号

    规格

    价格

    水中微生物DNA抽提Kit

    英文名:AquaScreen®  Fast Extract

    32-1010

    32-1050

    10次/盒

    50次/盒

    4600元

    20400元


    一、产品用途:

    水中微生物DNA提取试剂盒(英文名:AquaScreen® Fast Extract)用于从水样中提取微生物DNA。该试剂盒遵循ISO/TS 12869:2012的设计要求。提取的DNA可用于下游的PCR或qPCR检测。


    二、工作原理:

    该试剂盒采用0.4μm滤膜截获微生物,然后微生物被加入到滤膜上的离子活性剂和促溶剂裂解。随后进行DNA抽提。


    DNA抽提由四步组成:

    1. 菌体裂解

    2. DNA与离心柱的特异结合

    3. 祛除残留污染物和抑制剂

    4. DNA的洗脱

    整个过程大约30分钟。


    三、产品组成:

    试剂盒组分

    试剂盒(10/盒)

    试剂盒(50/盒)


    组分数量

    组分数量

    Membrane Filter(滤膜)

    10张

    50张

    Incubation Dishes(平皿)

    10块

    50块

    Incubation Tubes(孵育管)

    10管

    50管

    Spin Columns(离心柱)

    10管

    50管

    Collection Tubes(收集管)

    20管

    100管

    Sample Storage Tubes(样本保存管)

    10管

    50管

    Lysis Buffer(裂解液)

    25ml×1瓶

    110ml ×1瓶

    Binding Buffer(结合液)

    10ml×1瓶

    25ml×1瓶

    Wash Buffer 1(洗液1

    3ml×1管(第一次用前加3ml无水乙醇)

    15ml×1瓶(第一次用前加15ml无水乙醇)

    Wash Buffer 2(洗液2

    4ml ×1管(第一次用前加16ml无水乙醇)

    12ml×1瓶(第一次用前加48ml无水乙醇)

    Elution Buffer(洗脱液)

    2ml×1

    2ml×2管


    注: 批次质控证书(COA)可从MB厂家网站(http://www.dyshengwu.com)下载

    或向MB中国区总代理缔一生物(http://www.dyshengwu.com)索取。


    四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器:

    1. 水过滤设备(滤器、真空泵等)(详情参见附录)

    2. 无水乙醇

    3. 反应管(1.5ml或2ml)

    4. 离心机

    5. 恒温仪

    6. 移液器及带滤芯吸头(100l和1000l)

    7. 恒温箱


    五、样本制备须知:

    1. 饮用水、浴池水、泳池水及废水可作为样本。样本性状会影响结果的可靠性,并需要与ISO的水样采集指南一致(ISO Norm 5667-1至5667-10)。

    2. 该试剂盒还适合其他类型的水样本,如海水样本。但海水样本可能有重度的颗粒污染,会降低流速,导致淤积。可预先用常规滤纸过滤。该方法对于处理自来水,以检测自来水中的军团菌,效果很好。

    3. 水样应在2-8°C保存,在采集的2天内检测。不推荐使用防腐剂,因为会使菌体裂解,而滤膜只能截留完整的菌体。

    4. 凡是水样中有悬浮颗粒或固定挥发性成分,则需先用滤纸过滤。

    5. 样本不能离心。

    6. 该试剂盒所需样本体积建议为1000ml。样本体积最少应为100ml。

    7. 该试剂盒不会截获水中游离的DNA。

    8. 该试剂盒不能区分“活的可培养微生物”与“活的不可培养微生物”。


    六、操作注意事项:

    该试剂盒只用于科研,并且应仅由经过培训的实验室人员使用。

    所有样本应视为有潜在危害性,应小心处理。

    应始终穿上合适的防护服,戴一次性手套和护目镜。

    请勿向废弃液体中加漂白剂或酸性溶液。如有液体溅出,请用合适的去污剂和清水处理。

    废弃物可根据当地法规进行处理。

    Binding Buffer(结合液)含异丙醇和聚乙二醇辛基苯酚醚,易燃、有害、有腐蚀性。

    Wash Buffer 1(洗液1)含硫氰酸胍,有害、有腐蚀性。


    七、样本制备步骤:

    (一)操作步骤概览

    (二)操作步骤详解

    步骤1. 样本过滤

    1.1 从试剂盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。

    1.2 将滤膜放置在滤器中,并过滤必要体积的水样。

    步骤2. 菌体裂解

    * 提前准备:预先将恒温仪设置到70℃,将恒温箱设置到37℃。

    2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到试剂盒提供的Incubation Dish(平皿)中。

    2.2 吸取2ml lysis buffer(裂解液),并加到滤膜上。

    2.3 将滤膜浸泡在裂解液中,小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。

    2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜,并摇晃平皿10秒钟。

    2.5 将平皿中的400 μl裂解液转移至Incubation Tube(孵育管),70 °C孵育10分钟。

    2.5a可选项:剩余裂解液可再取400μl用于DNA抽提,以获得更多的DNA样本。

    2.6 样本短暂离心,并加入400 μl Binding Buffer(结合液),立即涡旋充分混匀,以防止DNA沉淀。请勿离心样本,并立即进行下一步。

    步骤3. DNA提取

    * 提前准备:(1)Wash Buffer 1(洗液1)和Wash Buffer 2(洗液2)第一次使用前,用无水乙醇复溶(请参见瓶上标签)

    (2)将恒温仪设置到70℃,并将Elution Buffer(洗脱液)放在上面预热。

    3.1 将步骤2.6中的混合液(~800 μl)转移到Collection Tube(收集管)内的Spin Column(离心柱)中,小心液体不要沾到离心柱的边缘。

    3.2 离心柱离心≥10000 × g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

    3.2a 可选择:在步骤2.5a中,多取的一份样本重复以上操作,不用换离心柱。

    3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

    3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g,1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。

    3.5最大速度离心3分钟,以去除残留的洗液2。

    3.6弃掉收集管。将离心柱插入到试剂盒提供的Sample Storage Tube(样本保存管)中。

    3.7吸取60μl已70℃预热的洗脱液,直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。

    3.8室温静置2分钟,然后离心8000×g,2分钟,以洗脱DNA。

    3.9样本保存管中的洗脱液即包含DNA,可直接用于PCR,或储存在2~8℃,可存放1周。长期储存是在≤-18℃。


    八、样本中的细菌数量计算

    样本中的细菌定量需使用PCR定量标准品和qPCR检测试剂盒(推荐使用德国MB的PCR定量标准品和AquaScreen®qPCR检测试剂盒,详见“九、水中细菌精准测定,还需要的相关试剂”)

    计算公式:基因组拷贝数/反应 × 比例因子× 校正因子×  = 微生物数量/升

    注:


    1. 样本中的基因组拷贝数:可通过标准曲线定量


    2. 比例因子:取1份400l裂解液,比例因子=5


    取2份400l裂解液,比例因子=2.5


    取3份400l裂解液,比例因子=1.67


    3. 校正因子:60l洗脱液中取10l用于qPCR反应,校正因子=6


    九、水中细菌精准测定,还需要的相关试剂:

    品牌

    品名

    货号

    规格

    德国MB

    水中军团菌qPCR检测试剂盒

    英文名:AquaScreen® Legionella species

    33-2025

    25次/盒

    33-2100

    100次/盒

    33-3250

    250次/盒

    德国MB

    水中嗜肺军团菌qPCR检测试剂盒

    英文名:AquaScreen® Legionella pneumophila

    34-2025

    25次/盒

    34-2100

    100次/盒

    34-2250

    250次/盒

    德国MB

    水中铜绿假单胞菌qPCR检测试剂盒

    英文名:AquaScreen® Pseudomonas aeruginosa

    34-6025

    25次/盒

    34-6100

    100次/盒

    34-6250

    250次/盒

    德国MB

    水中大肠埃希菌qPCR检测试剂盒

    英文名:AquaScreen® Escherichia coli

    34-7025

    25次/盒

    34-7100

    100次/盒

    34-7250

    250次/盒

    德国MB

    嗜肺军团菌基因组DNA定量标准品

    英文名:Legionella pneumophila PCR Quantification Standards

    52-0101

    1×108

    基因组拷贝/管+缓冲液2ml/管×3管/盒

    德国MB

    铜绿假单胞菌基因组DNA定量标准品

    英文名:Pseudomonas aeruginosa PCR Quantification Standards

    52-0071


    附录:


    适合AquaScreen®® Fast Extract的水过滤系统

    过滤装备

    外观图

    推荐供应商

    真空多联器

    3道或单道)

    真空多联器(3道或单道).png

    赛多利斯

    品名:Combisart®

    货号:16844 (3)

    货号:16842 (单道)

    漏斗

    (可反复使用,可用碱性去污剂祛除残留DNA)

    漏斗(可反复使用).png

    赛多利斯

    品名:Biosart® 250

    货号:16407-25-ALK

    滤器

    (适合47 mm50 mm滤膜。与漏斗和真空多联器配合用)

    滤器(适合47mm或50mm).png

    赛多利斯

    货号:16840

    真空泵

    真空泵.png

    赛多利斯

    品名:Microsart® maxi.vac / Microsart® mini.vac

    货号16694-2-50-22 /

    16694-2-50-06

    三角瓶

    ((可反复使用,可用碱性去污剂祛除残留DNA))

    三角瓶(可反复使用).png

    赛多利斯

    货号:16672-1

    导管

    (用于连接真空泵、真空多联器和三角瓶)

    (长度:约2米)

    导管(用于连接真空泵、真空多联器和三角瓶).png

    任何类型的纤维管,内径1cm



    (以上附录根据德国MB“MB_TN30.03EN_AquaScreen”文件编译)

    更多详情可访问,德国MB官网:www.minervabiolabs.com

    中国总代理北京缔一生物官网:www.dyshengwu.com

    咨询及订购热线:400-166-8600,13810768975,010-84118494

    Q Q:1580434811,1258888686

    邮箱:servicebj@viansaga.com



    (缔一生物)


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